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铜绿假单胞菌的确证性试验!

小杨 / 2019-09-28

正文

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铜绿假单胞菌的确证性试验

⒈营养琼脂

尽可能将所有经滤膜过滤后,在36℃±1℃培养了20h~24h,将需验证的可疑菌落划线接种营养琼脂培养基,于36℃±1℃培养20h~24h。检查再次纯化的菌落,并将最初显红褐色的菌落进行氧化酶试验。

⒉氧化酶试验

取2 滴~3 滴新鲜配制的氧化酶试剂滴到放于平皿里的洁净滤纸上。用铂金丝接种环或玻璃棒,将适量的纯种培养物涂布在预备好的滤纸上。在10s 内显深蓝紫色的视为阳性反应。也可以按照商品化氧化酶测试产品的说明书进行该项测试。

⒊金氏B(King′s B)培养基

将上述呈红褐色的且氧化酶反应呈阳性的培养物接种于金氏B 培养基上,于36℃±1℃恒温箱培养1d~5d。每天需取出在紫外灯下检查其是否产生荧光性,将5d 内产生荧光的菌落记录为阳性。

⒋乙酰胺肉汤

将5.4.1 中的纯培养物接种到装有乙酰胺肉汤的试管中,在36℃±1℃培养20h~24h。然后向每支试管培养物加入1 滴~2 滴钠氏试剂,检查各试管的产氨情况,如表现出从深黄色到砖红色的颜色变化,则为阳性结果,否则为阴性。

⒌计数

将产生绿脓色(蓝色/绿色)或氧化酶反应呈阳性,在紫外灯下产生荧光,且在乙酰胺肉汤中产氨的所有菌落证实为铜绿假单胞菌,并进行计数。

通过计数培养后的滤膜上的菌落以获得铜绿假单胞菌的数量。其他产生荧光或者呈红棕色的菌落需要进一步验证。

注:最初滤膜上显荧光的菌落经氧化酶反应均呈阳性,因此不需在这个测试中计数

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